Мултиплек Оне Степ РТ-кПЦР Премик-УНГ
Каталошки број: ХЦБ5145А
Мултиплек Оне Степ РТ-кПЦР Пробе Кит (УДГ Плус) је мултиплексни квантитативни ПЦР комплет заснован на РНК као шаблону.У процесу експеримента обављена је реверзна транскрипција и квантитативни ПЦР у истој епрувети, што је поједноставило рад експеримента и смањио ризик од контаминације.У овом комплету, први ланац цДНК је ефикасно синтетизован реверзном транскриптазом отпорном на топлоту и квантитативно амплификован помоћу ХотСтарт Таг ДНК полимеразе.Комплет углавном садржи оптимизовани МП пуфер, мешавину ензима, итд. Пуферски раствор већ садржи Мг2+и дНТП.Поред тога, додају се фактори који могу ефикасно инхибирати неспецифично ПЦР амплификацију и побољшати ефикасност амплификације вишеструких кПЦР реакција, што може осигурати ефикасност амплификације и извршити до вишеструке реакције амплификације.Систем дУТП/УДГ је додат како би се ефикасно спречио ризик од контаминације аеросолом.
Компоненте
1. Буффер
2. Мешавина ензима
Спецификација
| Хот Старт | Уграђени врући старт |
| Метода детекције | Детекција прајмера и сонде |
| ПЦР метода | РТ-кПЦР у једном кораку |
| Полимераза | Так ДНК полимераза |
| Врста узорка | ДНК |
Услови складиштења
Производ се испоручује са сувим ледом и може се чувати на -25~-15℃ 1 годину.Треба избегавати честезамрзавање-одмрзавање.Препоручљиво је сачувати одвојено.
Упутства
1.Реакција Систем
| Компоненте | Запремина (μЛ) | Коначна концентрација |
| 2 × МП бафер | 12.5 | 1× |
| Ензимска мешавина | 1 | - |
| Мешавина прајмера/сонде (2,5 μМ) | 3 | 0.3μМ |
| Темплате РНА | 1-10 | - |
| РНасе Фрее Х2О | до 25 | - |
напомене:
Обавезно добро промешајте пре употребе, избегавајте прекомерне мехуриће изазване насилним вибрацијама.
а.Концентрација прајмера: мешавина прајмера укључујући мултиплекс прајмер, у зависности од ситуације оптимална концентрација прајмера може бити између 0.л и 1.0μМ.
б.Концентрација сонде: Мешавина сонде укључујући флуоресцентну групу разлика у обележавању мултиплексне сонде, у зависности од ситуације, оптимална концентрација сонде може бити између 0,05 и 0,5 μМ.
ц.Разблаживање шаблона: кПЦР је веома осетљив и препоручује се разблаживање шаблона.Контролна вредност Цт је погодна између 20 и 35.
д.Припрема система: Молимо припремите у ултра чистом радном столу, пипетору и реакционој епрувети без остатка нуклеазе;препоручује се употреба главе пиштоља са филтерским елементом.Избегавајте унакрсну контаминацију и контаминацију аеросолом.
2. Оптимизовани бициклизамПротокол
| Циклус Корак | Темп. | време | Циклуси |
| Реверзна транскрипција | 50℃а | 20минс | 1 |
| Иницијална-денатурација | 95℃ | 5минс | 1 |
| Реакција појачања | 95℃ | 15сец |
40-45 |
| 60℃ b | 30сец c |
напомене:
а.Реверзна транскрипција: Температура може изабрати 42°Ц или 50°Ц.
б.Реакција амплификације: Температура се подешава према вредности Тм дизајнираних прајмера.
ц.Аквизиција флуоресцентног сигнала: Подесите експериментални поступак у складу са захтевима приручника за инструмент.
Напомене
Носите неопходну ЛЗО, као што су лабораторијски мантил и рукавице, како бисте осигурали своје здравље и безбедност.
