Комплет за генотипизацију миша

Каталошки број: ХЦР2021А

Овај производ је комплет дизајниран за брзу идентификацију генотипова миша, укључујући екстракцију сирове ДНК и ПЦР систем амплификације.Производ се може користити за ПЦР амплификацију директно из мишјег репа, уха, прстију и других ткива након једноставног цепања помоћу пуфера за лизу и протеиназе к.Нема дигестије преко ноћи, екстракције фенол-хлороформом или пречишћавања у колони, што је једноставно и скраћује време експеримената.Производ је погодан за амплификацију циљних фрагмената до 2 кб и мултиплекс ПЦР реакције са до 3 пара прајмера.2×Моусе Тиссуе Дирецт ПЦР мешавина садржи генетски модификовану ДНК полимеразу, Мг²⁺, дНТП и оптимизовани систем пуфера за обезбеђивање високе ефикасности амплификације и толеранције инхибитора, тако да се ПЦР реакције могу извести додавањем шаблона и прајмера и рехидратацијом производа до 1×.ПЦР производ амплификован овим производом има истакнуту „А“ базу на 3′ крају и може се користити директно за ТА клонирање након пречишћавања.

Компоненте

Услови складиштења

Производе треба чувати на -25~-15℃ 2 године.Након одмрзавања, пуфер за лизу се може чувати на 2 ~ 8 ℃ за краткорочну вишекратну употребу и добро измешати када се користи.

Апликација

Овај производ је погодан за анализу нокаута миша, трансгенску детекцију, генотипизацију и тако даље.

Карактеристике

1.Једноставна операција: нема потребе за екстраховањем геномске ДНК;

2.Широка примена: погодна за директно појачавање различитих ткива миша.

Упутства

1.Ослобађање геномске ДНК

1) Припрема лизата

Лизат ткива се припрема према броју узорака мишева који се лизирају (лизат ткива треба припремити на лицу места у складу са дозом и добро промешати за употребу), а пропорција реагенаса потребних за један узорак је следећа:

2) Припрема узорка и лиза

Препоручена употреба ткива

Узмите одговарајућу количину узорака мишјег ткива у чисте епрувете за центрифугирање, додајте 200 μЛ лизата свежег ткива у сваку епрувету за центрифугирање, протресите и протресите, затим инкубирајте на 55 ℃ 30 минута, а затим загревајте на 98 ℃ 3 минута.

3) Центрифугирање

Добро протресите лизат и центрифугирајте на 12.000 о/мин 5 минута.Супернатант се може користити као шаблон за ПЦР амплификацију.Ако је шаблон потребан за складиштење, пренесите супернатант у другу стерилну епрувету за центрифугирање и чувајте на -20 ℃ 2 недеље.

2.ПЦР амплификација

Уклоните 2×Моусе Тиссуе Дирецт ПЦР Мик са -20℃ и одмрзните на леду, помешајте наопако и припремите ПЦР реакцијски систем према следећој табели (радите на леду):

Белешка:

а) Додата количина не би требало да прелази 1/10 система, а ако се дода превише, ПЦР амплификација може бити инхибирана.

Препоручени ПЦР услови

Белешка:

а) Температура жарења: У односу на Тм вредност прајмера, препоручује се да се температура жарења подеси на мању вредност Тм прајмера +3~5℃.

Уобичајени проблеми и решења

1.Нема циљаних трака

1) Прекомерни продукт лизе.Изаберите најприкладнију количину шаблона, обично не више од 1/10 система;

2) Превелика величина узорка.Разблажите лизат 10 пута, а затим појачајте, или смањите величину узорка и поново лизујте;

3) Узорци ткива нису свежи.Препоручује се употреба свежих узорака ткива;

4) Лош квалитет прајмера.Користите геномску ДНК за амплификацију да бисте проверили квалитет прајмера и оптимизовали дизајн прајмера.

2.Неспецифично појачање

1) Температура жарења је прениска и број циклуса је превисок.Повећајте температуру жарења и смањите број циклуса;

2) Концентрација шаблона је превисока.Смањите количину шаблона или разблажите шаблон 10 пута након појачања;

3) Лоша специфичност прајмера.Оптимизујте дизајн прајмера.

Напомене

1.Да би се избегла унакрсна контаминација између узорака, потребно је припремити више алата за узорковање, а површина алата се може очистити 2% раствором натријум хипохлорита или средством за чишћење нуклеинске киселине након сваког узорковања ако је потребна поновљена употреба.

2.Препоручује се коришћење свежег ткива миша, а запремина узорковања не би требало да буде превелика да би се избегло утицај на резултате амплификације.

3.Пуфер за лизу треба да избегава често замрзавање-одмрзавање и може се чувати на 2~8℃ за краткорочну вишекратну употребу.Ако се складишти на ниској температури, може доћи до падавина, које се морају потпуно растворити пре употребе.

4.ПЦР мешавина треба да избегава често замрзавање-одмрзавање и може се чувати на 4℃ за краткотрајну поновљене употребе.

5.Овај производ је само за научна експериментална истраживања и не би требало да се користи у клиничкој дијагнози или лечењу.