Универзални СИБР ГРЕЕН кПЦР премикс (плави)

Каталошки број: ХЦБ5041Б

Универсал Блуе кПЦР Мастер Мик (на бази боје) је претходно решење за 2× квантитативну ПЦР амплфикацију у реалном времену коју карактерише висока осетљивост и специфичност, плаве је боје и има ефекат праћења додавања узорка.Основна компонента Так ДНК полимеразе користи антитело са врућим стартом да ефикасно инхибира неспецифично појачање услед жарења прајмера током припреме узорка.У исто време, формула додаје промотивне факторе за побољшање ефикасности амплификације ПЦР реакције и изједначавање амплификације гена са различитим садржајем ГЦ (30 ~ 70%), тако да квантитативни ПЦР може да добије добар линеарни однос у широком квантитативном регион.Овај производ садржи специјалну РОКС пасивну референтну боју, која је применљива на већину кПЦР инструмената.Није потребно подешавати концентрацију РОКС-а на различитим инструментима.Потребно је само додати прајмере и шаблоне да би се реакциони систем припремио за амплификацију.

Компоненте

Универсал Блуе кПЦР Мастер Мик

Услови складиштења

Производ се испоручује са пакетима леда и може се чувати на -25℃~-15℃ 18 месеци.Неопходно је избегавати јако зрачење светлости приликом складиштења или припреме реакционог система.

Спецификација

Упутства

1.Реацтион Систем

[Напомена]: Добро промешајте пре употребе да бисте избегли прекомерне мехуриће од снажног мућкања.

а) Концентрација прајмера: Коначна концентрација прајмера је 0,2 μмол/Л, а према потреби се може подесити између 0,1 и 1,0 μмол/Л.

б) Концентрација шаблона: Ако је шаблон неразблажен основни раствор цДНК, коришћена запремина не би требало да прелази 1/10 укупне запремине кПЦР реакције.

ц) Разблаживање шаблона: Препоручује се да се основни раствор цДНК разблажи 5-10 пута.Оптимална количина доданог шаблона је боља када је вредност Цт добијена амплификацијом 20-30 циклуса.

д) Реакциони систем: Препоручује се употреба 20μЛ или 50μЛ да би се обезбедила ефикасност и поновљивост амплификације циљног гена.

е) Припрема система: Молимо припремите се у супер чистој клупи и користите врхове и реакционе епрувете без остатака нуклеазе;препоручљиво је користити врхове са патронама филтера.Избегавајте унакрсну контаминацију и контаминацију аеросолом.

2.Програм реаговања

Стандардни програм

Брзи програм

[Напомена]: Брзи програм је погодан за огромну већину гена, а стандардни програми се могу испробати за појединачне сложене гене секундарне структуре.

а) Температура и време жарења: Подесите према дужини прајмера и циљног гена.

б) Прикупљање флуоресцентног сигнала (★): Подесите експериментални поступак у складу са захтевима у упутствима за употребу инструмента.

ц) Крива топљења: Стандардни програм инструмента може се нормално користити.

3. Анализа резултата 

За квантитативне експерименте биле су потребне најмање три биолошке реплике.Након реакције, потребно је потврдити криву амплификације и криву топљења.

3.1 Крива појачања:

Стандардна крива појачања је у облику слова С.Квантитативна анализа је најтачнија када вредност Цт падне између 20 и 30. Ако је вредност Цт мања од 10, потребно је разблажити шаблон и поново извршити тест.Када је вредност Цт између 30-35, потребно је повећати концентрацију шаблона или запремину реакционог система, како би се побољшала ефикасност амплификације и обезбедила тачност анализе резултата.Када је вредност Цт већа од 35, резултати теста не могу квантитативно анализирати експресију гена, али се могу користити за квалитативну анализу.

3.2 Крива топљења:

Појединачни врх криве топљења указује да је специфичност реакције добра и да се може извршити квантитативна анализа;ако крива топљења показује двоструке или вишеструке пикове, квантитативна анализа се не може извршити.Крива топљења показује двоструке пикове и потребно је проценити да ли је нециљани пик прајмер димер или неспецифична амплификација електрофорезом ДНК агарозног гела.Ако је у питању димер прајмера, препоручује се смањење концентрације прајмера или редизајн прајмера са високом ефикасношћу амплификације.Ако је у питању неспецифично појачање, повећајте температуру жарења или редизајнирајте прајмере са специфичношћу.

Напомене

Носите неопходну ЛЗО, као што је лабораторијски мантил и рукавице, како бисте осигурали своје здравље и сигурност!

Овај производ је САМО за истраживачку употребу!