2×Сенси Дирецт Премик-УНГ (Пробе кПЦР)
Каталошки број: ХЦБ5151А
СенсиДирецт Премик-УНГ (Пробе кПЦР) је дизајниран да изводи ПЦР директно из узорака без екстракције ДНК или припреме узорка.Овај реагенс се састоји од ДНК полимеразе са врућим стартом, урацил ДНК гликозилазе (УНГ), инхибитора РНазе, МгЦл2, дНТП (са дУТП уместо дТТП) и стабилизатори, за квантитативни ПЦР (кПЦР).Овај реагенс има високу отпорност на инхибиторе, па се може директно применити на детекцију узорака као што су брис грла, пљувачка, антикоагулирана пуна крв, плазма и серум без екстракције ДНК.Реагенс користи власнички пуфер за кПЦР са мешаним ензимима анти-инхибиторне ДНК полимеразе и УНГ ензима.Због тога може да добије добро појачање циљних гена у узорцима који садрже инхибиторе и да инхибира лажно позитивну амплификацију изазвану ПЦР резидуалним и аеросолним загађењем.Овај реагенс је компатибилан са већином флуоресцентних квантитативних ПЦР инструмената, као што су Апплиед Биосистемс, Еппендорф, Био-Рад, Роцхе и тако даље.
Компоненте
1. 50×СенсиДирецт Ензим/УНГ мешавина
2. 2×СенсиДирецт премикс бафер (дУТП)
Услови складиштења
Све компоненте треба чувати на -20 ℃ за дуготрајно складиштење и 4 ℃ до 3 месеца.Молимо вас да добро промешајте након одмрзавања и центрифугирајте пре употребе.Избегавајте често замрзавање-одмрзавање.
Цицлинг Протоцол
| Корак | Температура | време | Циклус |
| Варење | 50℃ | 2мин | 1 |
| Активација полимеразе | 95℃ | 1-5мин | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10-20с | 40-50 |
| Жарење/продужење | 56-64℃ | 20-60с |
Упутства за пипетирање
| Реагенс | Волуме пер реакција | Волумен по реакцији | Коначна концентрација |
| 2×СенсиДирецт премикс бафер (дУТП) | 12,5µЛ | 25µЛ | 1× |
| 50×СенсиДирецт Ензим/УНГ микс | 0.5µЛ | 1µЛ | 1× |
| 25×Пример-Пробе Мик1, 2 | 1µЛ | 2µЛ | 1× |
| Узорак3, 4 | - | - | - |
| ддХ2O | - | - | - |
| Укупан обим | 25 μЛ | 50 μЛ | - |
1. Коначна концентрација прајмера је обично 0,2 μМ.За боље резултате, концентрација прајмера се може оптимизовати у опсегу од 0,2-1 μМ.
2. Генерално, концентрација сонде се може оптимизовати у опсегу од 0,1-0,3 μМ.Оптимална концентрација сонде је повезана са инструментом за ПЦР амплификацију у реалном времену, типом сонде и типом супстанце за флуоресцентно обележавање.Молимо погледајте упутство за инструменте или специфичне захтеве сваке флуоресцентне сонде.
3. Различити типови узорака садрже различите типове и садржај инхибитора и број копија циљног гена.Запремину узорка треба узети у обзир према стварном стању.Направите разблаживање узорка додавањем воде без нуклеаза или ТЕ пуфера, ако је потребно.
4. Препоручена запремина различитих узорака:
| Узорак | Волумен за један 50 μЛ реакција | Максимум однос |
| Антикоагулирана пуна крв | 2,5 μЛ | 5% |
| Плазма | 15 μЛ | 30% |
| Серум | 10 μЛ | 20% |
| Брис грла | 10 μЛ | 20% |
| Пљувачка | 10 μЛ | 20% |
Контрола квалитета
1. Детекција функције: осетљивост, специфичност и поновљивост кПЦР.
2. Нема активности егзогене нуклеазе: нема загађења егзогеном ендонуклеазом и егзонуклеазом.
Напомене о производу
1. Овај производ користи нови тип ДНК полимеразе са врућим стартом, која се може активирати за 1-5 минута. Пошто је његов реакциони пуфер оптимизован, погоднији је за квантитативни ПЦР са двоструком или вишеструком флуоресценцијом коришћењем методе сонде.
2. Ако је Рн вредност ПЦР амплификације прениска или је амплификација очигледно инхибирана, смањење количине узорка, повећање запремине реакције или претходно разблаживање узорка може побољшати резултате.
3. Прикупљање крви, пљувачке, урина, бриса грла итд. треба да прати захтеве клиничких критеријума, а свеж узорак се може користити за спречавање разградње нуклеинске киселине.
4. Пошто различити ампликони имају различиту ефикасност коришћења у односу на дУТП и осетљивост на УНГ, реагенсе треба оптимизовати ако се осетљивост детекције смањи када се користи УНГ систем.Молимо контактирајте нас за техничку подршку ако је потребно.
5. Да би се избегла амплификација ПЦР продуката који се преносе између реакција у једном кораку, за амплификацију су потребни наменски експериментални простор и пипета.Радите у рукавицама и често се мењајте и не отварајте реакциону епрувету након ПЦР амплификације.
