5×Неосцрипт Фаст РТ-кПЦР Премик плус-УНГ
Каталошки број: ХЦБ5142А
Неосцрипт Фаст РТ Премик-УНГ (Пробе кРТ-ПЦР) је високо стабилна мешавина заснована на сонди у једној епрувети погодна за реверзну транскрипцију у једном кораку и квантитативну ПЦР (кРТ-ПЦР).Подржава претходно мешање прајмера и сонди и остаје стабилан након дугог складиштења на ниској температури.Узорак који се тестира може се додати директно приликом употребе, без додатног отварања епрувете/пипетирања.Овај производ обезбеђује компоненте, нпр. ДНК полимеразу са врућим стартом, М-МЛВ, топлотно лабилну урацил ДНК гликозилазу (ТС-УНГ), инхибитор РНазе, МгЦл2, дНТП (са дУТП уместо дТТП) и стабилизатори.Са генетски модификованом брзом амплификацијом реверзне транскриптазе и ДНК полимеразе, могуће је завршити ПЦР амплификацију у року од 20-40 минута.Овај реагенс користи посебан пуфер за кПЦР са мешаним ензимима ензима анти-инхибиторне амплификације и ензима УНГ.Због тога може да добије добро појачање циљних гена и спречи лажно појачање узроковано ПЦР резидуалним и аеросолним загађењем.Овај реагенс је компатибилан са већином флуоресцентних квантитативних ПЦР инструмената произвођача као што су Апплиед Биосистемс, Еппендорф, Био-Рад и Роцхе.
Саставни део
1.25×Неосцрипт Фаст РТасе/УНГ микс
2.5×Неосцрипт Фаст РТ Премик бафер (дУТП)
Услови складиштења
Све компоненте треба чувати на -20 ℃ за дуготрајно складиштење и 4 ℃ до 3 месеца.Молимо вас да добро промешајте након одмрзавања и центрифугирајте пре употребе.Избегавајте често замрзавање-одмрзавање.
Припрема система кРТ-ПЦР реакције
| Компоненте | 25μЛСистем | 50μЛСистем | Коначна концентрација |
| 5×Неосцрипт Фаст РТ Премик бафер (дУТП) | 5μЛ | 10μЛ | 1× |
| 25×Неосцрипт Фаст РТасе/УНГ микс | 1μЛ | 2μЛ | 1× |
| 25×Пример-Пробе Микa | 1μЛ | 2μЛ | 1× |
| Темплате РНАb | – | – | – |
| ддХ2O | До 25 μЛ | До 50 μЛ | – |
1) а. Коначна концентрација прајмера је обично 0,2 μМ.За боље резултате, концентрација прајмера се може оптимизовати у опсегу од 0,2-1 μМ.Генерално, концентрација сонде се може оптимизовати у опсегу од 0,1-0,3 μМ.
2) б. Када се користи брза ПЦР процедура, повећање концентрације прајмера и сонди може резултирати бољим резултатима амплификације, а њихов однос треба оптимизовати у складу са тим.
3) Различити типови узорака садрже различите врсте и садржај инхибитора и број копија циљног гена.Запремину узорка треба узети у обзир према стварном стању.Разблажите узорак водом без нуклеаза или ТЕ пуфером, ако је потребно.
Реакција Цуслови
| Редовна ПЦР процедура | Брза ПЦР процедура | ||||||
| Процедура | Темп. | време | Циклус | Процедура | Темп. | време | Циклус |
| Реверзна транскрипција | 50℃ | 10-20 мин | 1 | Реверзна транскрипција | 50℃ | 5минс | 1 |
| Полимераза Активација | 95℃ | 1-5 мин | 1 | Полимераза Активација | 95℃ | 30с | 1 |
| Денатурација | 95℃ | 10-20с | 40-50 | Денатурација | 95℃ | 1-3с | 40-50 |
| Жарење и Продужетак | 56-64℃ | 20-60с | Жарење и Продужетак | 56-64℃ | 3-20с | ||
Контрола квалитета
1.Детекција функције: осетљивост, специфичност и поновљивост кПЦР-а.
2.Нема активности егзогене нуклеазе: нема загађења егзогеном ендонуклеазом и егзонуклеазом.
Напомене
1.Брзина амплификације брзе ДНК полимеразе није мања од 1кб/10с.Различити ПЦР инструменти имају различите брзине грејања и хлађења, режиме контроле температуре и топлотну проводљивост, па је стога оптимизација концентрације прајмера/сонде и метода рада у комбинацији са вашим специфичним брзим ПЦР инструментом од суштинског значаја.
2.Овај производ има широку примену и погодан је за молекуларну дијагностику високе осетљивости.Метода ПЦР у три корака се препоручује за прајмере са ниском температуром жарења или за амплификацију дугих фрагмената преко 200 бп.
3.Пошто различити ампликони имају различиту ефикасност коришћења дУТП-а и различиту осетљивост на УНГ, реагенсе треба оптимизовати ако се осетљивост детекције смањи када се користи УНГ систем.Молимо контактирајте нас за техничку подршку ако је потребно.
4.Да би се избегла амплификација ПЦР производа који се преносе, потребна је посебна експериментална област и пипета за амплификацију.Радите у рукавицама и често се мењајте и не отварајте ПЦР епрувету након амплификације.
