Инхибитор Рназе (без глицерола)
Инхибитор мишје РНазе је рекомбинантни инхибитор мишје РНазе експримиран и пречишћен из Е.цоли.Везује се за РНКазу А, Б или Ц у односу 1:1 кроз нековалентно везивање, чиме инхибира активност три ензима и штити РНК од деградације.Међутим, није ефикасан против РНазе 1, РНазе Т1, С1 нуклеазе, РНазе Х или РНазе из Аспергиллус-а.Инхибитор мишје РНазе је тестиран помоћу РТ-ПЦР, РТ-кПЦР и ИВТ мРНА и био је компатибилан са различитим комерцијалним реверзним транскриптазама, ДНК полимеразама и РНК полимеразама.
У поређењу са хуманим инхибиторима РНКазе, мишји инхибитор РНКазе не садржи два цистеина који су високо осетљиви на оксидацију која изазива инактивацију инхибитора.То га чини стабилним при ниским концентрацијама ДТТ (мање од 1 мМ).Ова карактеристика га чини погодним за употребу у реакцијама где су високе концентрације ДТТ штетне за реакцију (нпр. РТ-ПЦР у реалном времену).
Aапликација
Овај производ се може широко користити у било ком експерименту где је могућа интерференција РНасе да би се избегла деградација РНК, као што су:
1. Синтеза цДНК првог ланца, РТ-ПЦР, РТ-кПЦР, итд.;
2.Заштитити РНК од деградације у ин-витро транскрипцији/транслацији (нпр. вирусна репликација ин витро);
3. Инхибиција активности РНКазе током изолације и пречишћавања РНК.
Услови складиштења
Чувати на -25～-15℃;
Циклуси замрзавања-одмрзавања ≤ 5 пута;
Важи 1 година.
Дефиниција јединице
Једна јединица је дефинисана као количина инхибитора РНазе која је потребна да инхибира активност 5 нг РНазе А за 50%.
Молекуларна тежина
Инхибитор РНазе (без глицерола) је протеин од 50 кДа.
Контрола квалитета
Егзонуклеаза Активност:
Инкубација 40 У ензима са 1 μг λ-Хинд ИИИ дигестије ДНК током 16 сати на 37°Ц није резултирала деградацијом ДНК као што је утврђено гел електрофорезом.
Активност ендонуклеазе:
Инкубација 40 У ензима са 1 μг λ ДНК током 16 сати на 37°Ц није довела до детектабилне деградације ДНК као што је утврђено гел електрофорезом.
Ницкинг Активност:
Инкубација 40 У ензима са 1 μг пБР322 током 16 сати на 37 ℃ није резултирала деградацијом ДНК која се није могла детектовати као што је утврђено гел електрофорезом.
РНасе Активност:
Инкубација 40 У ензима са 1,6 μг МС2 РНК током 4 сата на 37 ℃ није резултирала деградацијом РНК као што је утврђено гел електрофорезом.
E.цоли ДНК:
ТакМан кПЦР детектује 40 У ензима.ДНК Е.цоли је ≤ 0. 1пг/40У.
Nотеs
1. Немојте насилно трести или мешати да бисте спречили инактивацију ензима.
2. Инхибитор РНазе је активан на температурама у распону од 25℃ до 55℃ и инактивиран је на ≥65℃.
3. Активност РНазе Х, РНазе 1 и РНазе Т1 није инхибирана.
4. Опсег пХ за инхибицију активности РНКазе је широк (активан на пХ 5-9), показујући максималну активност при пХ 7-8.
