Суперстарт кПЦР Премик плус-УНГ
Каталошки број: ХЦБ5071Е
Суперстарт кПЦР Премик плус-УНГ је специјализовани реагенс дизајниран за квалитативне и квантитативне реакције ПЦР у реалном времену користећи детекцију засновану на сонди, развијен посебно за процесе лиофилизације.Садржи нови хот-старт ензим Хотстарт Так плус (ДГ), чија је активност Так ензима затворена на собној температури, ефикасно инхибирајући неспецифично појачавање узроковано неспецифичним жарењем прајмера или формирањем димера прајмера под условима ниске температуре, чиме се побољшава специфичност реакције амплификације.Овај реагенс користи оптимизовани кПЦР специфичан пуфер и УНГ/дУТП систем за заштиту од контаминације да би се постигао брзи врући старт, значајно побољшавајући ефикасност и осетљивост кПЦР реакција.Може да добије добре стандардне криве у широком опсегу квантитационих области и прецизно изврши квантификацију, ефикасно спречавајући лажно позитивно појачање узроковано резидуалним ПЦР производима или контаминацијом аеросолом.Овај реагенс је компатибилан са већином флуоресцентних квантитативних ПЦР инструмената произвођача као што су Апплиед Биосистемс, Еппендорф, Био-Рад и Роцхе итд., и показује добру стабилност у лиофилизованом облику.
Састав реагенса
1. 5×ХотстартПремик плус-УНГ (Мг2+бесплатно) (ДГ)
2. 250 мМ МгЦл2
3. 4×лиопротектант (опционо)
Услови складиштења
Дуготрајно складиштење на -20 ℃;може се чувати на 4 ℃ до 3 месеца.Добро промешајте пре употребе иизбегавајте поновно замрзавање и одмрзавање.
Цицлинг Протоцол
| Процедура | Темп. | време | Циклус |
| Варење | 50℃ | 2 мин | 1 |
| Активација полимеразе | 95℃ | 1~5 мин | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10~20 с | 40-50 |
| Жарење и проширење | 56~64℃ | 20~60 с | 40-50 |
кПЦР Ликуид Реацтион Сиприпрема стабљике
|
Композиција |
25µЛ Волуме |
50µЛ Волуме |
Коначна концентрација |
| 5×ХотстартПремик плус-УНГ(Мг2+бесплатно) (ДГ) | 5µЛ | 10µЛ | 1× |
| 250мМ МгЦл2 | 0,45µЛ | 0.9µЛ | 4,5 мМ |
| 4×лиопротецтант1 | 6.25µЛ | 12,5µЛ | 1× |
| 25×Пример-Пробе Мик2 | 1µЛ | 2µЛ | 1× |
| Шаблон ДНК3 | —— | —— | —— |
| ддХ2O | До 25µЛ | До 50µЛ | —— |
1. Коначна концентрација од 0,2 μМ за прајмере обично даје добре резултате;када је учинак реакције лош, прилагодите концентрацију прајмера у опсегу од 0,2-1 μМ по потреби.Концентрација сонде се обично оптимизује у опсегу од 0,1-0,3 μМ кроз експерименте са градијентом да би се пронашле оптималне комбинације.
2. Број копија циљних гена садржаних у различитим типовима шаблона варира;ако је потребно, градијентно разблаживање се може извршити да би се одредила оптимална количина додатка шаблона.
3. Овај систем може бити лиофилизован;када купци користе овај систем без захтева за сушење замрзавањем, 4× лиопротектант се може селективно додати; ако су потребни производи осушени замрзавањем, током фазе валидације перформанси производа у фази течних реагенса, мора се додати 4× лиопротектант да би се обезбедила конзистентност са компонентама лиофилизованог система и ефекти.
Када се систем користид за сушење замрзавањем, припремите система as следећи:
| Композиција | 25µЛ Реакциони систем |
| 5 ×ХотстартПремик плус-УНГ (Мг2+бесплатно) (ДГ) | 5µЛ |
| 250мМ МгЦл2 | 0,45µЛ |
| 4×лиопротецтант | 6.25µЛ |
| 25×Пример-Пробе Мик | 1µЛ |
| ддХ2O | До 18~20µЛ |
* Ако су потребни други системи за сушење замрзавањем, обратите се посебно.
Лиопхилизатион Процеss
| Процедура | Темп. | време | Стање | Притисак |
| Пре-фризинг | 4℃ | 30 мин | Држати |
1 атм |
| -50℃ | 60 мин | Хлађење | ||
| -50℃ | 180 мин | Држати | ||
| Примарно сушење | -30℃ | 60 мин | Грејање |
Ултимате Вацуум |
| -30℃ | 70 мин | Држати | ||
| Секундарно сушење | 25℃ | 60 мин | Грејање |
Ултимате Вацуум |
| 25℃ | 300 мин | Држати |
2. Горе наведени процес лиофилизације је само за референцу.Различити типови производа и различити уређаји за сушење замрзавањем имају различите параметре, тако да се прилагођавања могу извршити у складу са стварнимусловима током употребе.
3. Различити процеси лиофилизације могу бити погодни за различите величине серија лиофилизованихпроизвода, тако да се мора извршити довољна валидација тестирања када се користи за производњу великих размера.
Упутство за употребу лиофилизад прах
1. Кратко центрифугирајте лиофилизовани прах;
2. Додати шаблон нуклеинске киселине у лиофилизовани прах и додати воду до 25 µЛ;
3. Добро промешати центрифугирањем и ставити на машину.
Контрола квалитета:
1. Функционално тестирање: осетљивост, специфичност, репродуктивност кПЦР-а.
2. Нема активности егзогене нуклеазе, нема егзогене контаминације ендо/егзонуклеазом.
Техничке информације:
1. Суперстарт кПЦР Премик плус-УНГ користи нови хот-старт ензим који омогућава брзо покретање вруће у року од 1~5 минута;кроз специјалну формулацију пуфера погодан је за мултиплекс флуоресцентне квантитативне ПЦР реакције.
2. Има већу специфичност која значајно побољшава осетљивост квантитативног ПЦР детекције флуоресценције, нормализујући криве амплификације, вредност флуоресценције постиже очигледно побољшање на шаблонима ниске концентрације, погодним као високоосетљиви квантитативни ПЦР реагенси за детекцију флуоресценције.
3. За прајмере са нижом температуром жарења или фрагментима дужим од 200 бп, препоручује се метода у 3 корака.
4. Ефикасност коришћења дУТП-а и осетљивост на УНГ ензим се разликују за различите циљне гене, тако да ако коришћење УНГ система доводи до смањења осетљивости детекције, реакциони систем треба прилагодити и оптимизовати.Ако је потребна техничка подршка, контактирајте нашу компанију.
5. Користите наменске области и пипете пре и после амплификације, носите рукавице током рада и често их мењајте;не отварајте реакциону епрувету након завршетка ПЦР-а да бисте минимизирали контаминацију узорака ПЦР производима.
