Урацил ДНК гликозилаза
Урацил-ДНК гликозилаза (УНГ или УДГ) је рекомбинантни клон Е.цоли са молекулском тежином од 25 кДа.Он катализује ослобађање слободног урацила из једноланчане и дволанчане ДНК која садржи урацил, и неактиван је против РНК и може се користити за спречавање контаминације производа ПЦР амплификације.Принцип деловања се заснива на чињеници да ако се дУТП замени дТТП у ПЦР реакцији и формира се производ ПЦР амплификације који садржи дУ базе, ензим може селективно разбити гликозидну везу У база у једноланчаним и дволанчаним ДНК и деградирати производ ПЦР амплификације.
Препоручена апликација
Појачавање превенције контаминације
Кондиција складишта
-20°Ц за дуготрајно складиштење, треба добро промешати пре употребе, избегавати често замрзавање-одмрзавање.
Бафер за складиштење
20 мМ Трис-ХЦл (пХ 8,0), 150 мМ НаЦл, 1 мМ ЕДТА, 1 мМ ДТТ, стабилизатор, 50% глицерол.
Дефиниција јединице
Количина ензима потребна за разградњу 1 µг једноланчане ДНК која садржи дУ базе за 1 сат на 37°Ц је 1 јединица.
Контрола квалитета
1.СДС-ПАГЕ електрофоретска чистоћа већа од 98%
2.Осетљивост појачања, контрола од серије до серије, стабилност
3.Након што се 1У УНГ третира на 50℃ током 2 минута, шаблон који садржи У испод 103 копије треба да буде потпуно деградиран и не може се произвести производ за појачавање
4.Нема активности егзогене нуклеазе
Упутства
| Компоненте | Запремина (μЛ) | Коначна концентрација |
| 10 × ПЦР пуфер (без дНТП, Мг²+бесплатно) | 5 | 1× |
| дУТП (дЦТП, дГТП, дАТП) | - | 200 μМ |
| дУТП (замени дТТП) | - | 200-600 μМ |
| 25 мМ МгЦл2 | 2-8 μЛ | 1-4 мМ |
| 5 У/μЛ Так | 0,25 | 1,25 У |
| 5 У/μЛ УНГ | 0,25 (0,1-0,5) | 0,25 У (0,1-0,5) |
| 25 × Прајмер Мика | 2 | 1× |
| Темплате | - | <1μг/реакција |
| ддХ₂О | До 50 | - |
Белешка: а: Ако се користи за кПЦР/кРТ-ПЦР, флуоресцентну сонду треба додати у реакциони систем.Обично, коначна концентрација прајмера од 0,2 μМ може дати добре резултате;када је учинак реакције лош, концентрација прајмера се може подесити у опсегу од 0,2-1 μМ.Обично се концентрација сонде оптимизује у опсегу од 0,1-0,3 μМ.Експерименти са градијентом концентрације могу се извести да би се пронашла најбоља комбинација прајмера и сонде.
Напомене
1.УНГ ензим се може користити за уклањање контаминираних продуката дУТП амплификације из реакционог система пре реакције ПЦР амплификације, а затим да би се избегли лажно позитивни резултати због контаминације производа.
2.Оптимална температура за УНГ ензим који се користи у ПЦР реакцији против контаминације је генерално 50℃ током 2 минута;стање инактивације је 95 ℃ током 5 минута.
3.Избегавајте често замрзавање-одмрзавање и не излажите великим температурним колебањима.
4.Различити гени који се амплифицирају имају различиту ефикасност искоришћења дУТП-а и осетљивост на УНГ ензим, стога, ако употреба УНГ система доводи до смањења осетљивости детекције, реакциони систем треба прилагодити и оптимизовати, ако вам је потребна техничка подршка, контактирајте наша фирма.
