Дназа И (без Рназе) (5у/ул)
Каталошки број: ХЦ4007А
ДНаза И (деоксирибонуклеаза И) је ендодеоксирибонуклеаза која може да свари једноланчану или дволанчану ДНК.Он препознаје и цепа фосфодиестарске везе да би произвео монодеоксинуклеотиде или једноланчане или дволанчане олигодеоксинуклеотиде са фосфатним групама на 5'-терминалу и хидроксил на 3'-терминалу.Активност ДНазе И зависи од Ца2+и може се активирати јонима двовалентних метала као што је Мн2+и Зн2+.5 мМ Ца2+штити ензим од хидролизе.У присуству Мг2+, ензим може насумично препознати и цепати било које место на било ком ланцу ДНК.У присуству Мн2+, двоструки ланци ДНК се могу истовремено препознати и одцепити на скоро истом месту да би се формирали равни ДНК фрагменти или лепљиви крајњи ДНК фрагменти са 1-2 нуклеотида који вире.
Компоненте
| Име | 0.1КУ | 1КУ | 5 КУ | 50 КУ |
| ДНаза И, без РНазе | 20μЛ | 200μЛ | 1мЛ | 10 мЛ |
| 10×ДНасе И пуфер | 1мЛ | 1мЛ | 5 × 1мЛ | 5 × 10 мЛ |
Услови складиштења
-25℃~-15℃ за складиштење;Транспорт испод леда.
Упутства
1. Припремите реакциони раствор у епрувети без РНазе у складу са пропорцијама наведеним у наставку:
| Саставни део | Волуме |
| РНА | Кс µг |
| 10 × ДНасе И пуфер | 1μЛ |
| ДНаза И, без РНазе (5У/μЛ) | 1 У по µг РНК① |
| ддХ2O | До 10 μЛ |
Напомена: ①Израчунајте запремину ДНазе И коју треба додати на основу количине РНК.
2. 37 ℃ 15 минута;
3. Додајте 0,5М ЕДТА до коначне концентрације од 2,5мМ~5мМ и загревајте на 65℃ 10 минута да зауставите реакцију.Узорак се може директно користити за следећу реакцију као што је реверзна транскрипцијаексперимент.
Дефиниција јединице
Једна јединица је дефинисана као количина ензима која ће потпуно разградити 1 µг пБР322ДНК за 10 минута на 37 ℃.
Контрола квалитета
РНасе:5У ДНазе И са 1,6 µг МС2 РНК током 4 сата на 37 ℃ не даје деградацију каоодређена електрофорезом у агарозном гелу.
Напомене
1. Молимо вас да сами припремите 0,5МЕДТА.
2. Користите 1У ДНазу И по µг РНК.Међутим, ако је РНК мања од 1 µг, користите 1У ДНазу И.
3. Поставите ензим на лед током рада.
