Температурно осетљив УНГ
Температурно осетљив УНГ (ТС-УНГ) је добијен рекомбинантном експресијом у Е. цоли.Ензим катализује ослобађање слободног урацила из једноланчане и дволанчане ДНК која садржи урацил и неактиван је против РНК.У поређењу са конвенционалним УНГ ензимом гена Е. цоли, ензим ТС-УНГ има већу активност на ниским температурама (20℃~37℃) и осетљив је на температуру и лако се инактивира (50℃), избегавајући деградацију амплификације која садржи дУТП производе на собној температури резидуалном активношћу која може остати након инактивације конвенционалног УНГ ензима.Стога, ТС-УНГ ензим није погодан само за реакцију превенције контаминације ПЦР-ом, већ се такође добро поклапа са РТ-ПЦР програмом амплификације и може се користити у реакцији превенције контаминације РТ-ПЦР-ом.
Препоручена апликација
Појачавање превенције контаминације
Кондиција складишта
-20°Ц за дуготрајно складиштење, треба добро промешати пре употребе, избегавати често замрзавање-одмрзавање.
Бафер за складиштење
20 мМ Трис-ХЦл (пХ 7,5), 100 мМ НаЦл, 0,1 мМ ЕДТА, 1 мМ ДТТ, стабилизатор, 50% глицерол.
Дефиниција јединице
Количина ензима потребна за разградњу 1 µг једноланчане ДНК која садржи дУ базе за 1 сат на 37°Ц је 1 јединица активности (У).
Контрола квалитета
1.СДС-ПАГЕ електрофоретска чистоћа већа од 98%
2.Активност разградње, контрола од серије до серије, стабилност
3.Нема активности егзогене нуклеазе, нема егзогене ендонуклеазе или контаминације егзонуклеазом.
Упутства
| Компоненте | Запремина (μЛ) | Коначна концентрација |
| 10 × ПЦР пуфер (без дНТП, Мг²+бесплатно) | 5 | 1× |
| дУТП (дЦТП, дГТП, дАТП) | - | 200 μМ |
| дУТП (замени дТТП) | - | 200-600 μМ |
| 25 мМ МгЦл2 | 2-8 μЛ | 1-4 мМ |
| 5 У/μЛ Так | 0,25 | 1,25 У |
| 1 У/μЛТС-УНГ | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 У (0,1-0,5У) |
| 25 × Прајмер Мика | 2 | 1× |
| Темплате | - | <1μг/реакција |
| ддХ₂О | До 50 | - |
Напомена: а: Ако се користи за кПЦР/кРТ-ПЦР, флуоресцентну сонду треба додати у реакциони систем.Обично, коначна концентрација прајмера од 0,2 μМ може дати добре резултате;када је учинак реакције лош, концентрација прајмера се може подесити у опсегу од 0,2-1 μМ.Обично се концентрација сонде оптимизује у опсегу од 0,1-0,3 μМ.Експерименти са градијентом концентрације могу се извести да би се пронашла најбоља комбинација прајмера и сонде.
Напомене
1.Оптимална температура реакције ТС-УНГ ензима је релативно ниска и може се оптимизовати у опсегу од 20℃~37℃, доза ензима и време реакције могу се оптимизовати у опсегу од 0,1~0,5 У, 5~ 10 мин;а ензим може бити инактивиран у процесу реверзне транскрипције.
2.Погодан је за ПЦР и РТ-ПЦР да спречи контаминацију.
3.Избегавајте често замрзавање-одмрзавање и не излажите великим температурним колебањима.
4.Различити гени који се амплифицирају имају различиту ефикасност искоришћења дУТП-а и осетљивост на УНГ ензим, стога, ако употреба УНГ система доводи до смањења осетљивости детекције, реакциони систем треба прилагодити и оптимизовати, ако вам је потребна техничка подршка, контактирајте наша фирма.
