Бст 2.0 ДНК полимераза (без глицерола)
Бст ДНК полимераза В2 је изведена из Бациллус стеаротхермопхилус ДНК полимеразе И, која има активност 5′→3′ ДНК полимеразе и јаку активност замене ланца, али нема активност 5′→3′ егзонуклеазе.Бст ДНК полимераза В2 је идеално погодна за померање ланаца, изотермно појачање ЛАМП (изотермно појачање посредовано петљом) и брзо секвенцирање.
Компоненте
| Саставни део | ХЦ5005А-01 | ХЦ5005А-02 | ХЦ5005А-03 |
| БстДНАполимераза В2 (без глицерола) (8У/μЛ) | 0,2 мЛ | 1 мЛ | 10 мЛ |
| 10×ХЦ Бст В2 пуфер | 1,5 мЛ | 2×1,5 мЛ | 3×10 мЛ |
| МгСО4(100мМ) | 1,5 мЛ | 2×1,5 мЛ | 2×10 мЛ |
Апликације
1.ЛАМП изотермно појачање
2. Реакција једноструког померања ДНК ланца
3. Високо ГЦ секвенцирање гена
4.ДНК секвенцирање нивоа нанограма.
Кондиција складишта
Транспортовати на 0°Ц и чувати на -25°Ц~-15°Ц.
Дефиниција јединице
Једна јединица је дефинисана као количина ензима која инкорпорира 25 нмол дНТП у материјал нерастворљив у киселини за 30 минута на 65°Ц.
Контрола квалитета
1.Тест чистоће протеина (СДС-ПАГЕ):Чистоћа Бст ДНК полимеразе В2 је ≥99% одређена СДС-ПАГЕ анализом користећи Цоомассие Блуе детекцију.
2.Еконуцлеасе Ацтивити:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1 μг λ -Хинд Ⅲ дигестије ДНК током 16 сати на 37 ℃ не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.
3.Ницкасе Ацтивити:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1 μг пБР322 ДНК током 16 сати на 37°Ц не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.
4.Активност РНасе:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1,6 μг МС2 РНК током 16 сати на 37°Ц не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.
5.ДНК Е. цоли:120 У Бст ДНК полимеразе В2 је прегледано на присуство геномске ДНК Е. цоли коришћењем ТакМан кПЦР са прајмерима специфичним за локус Е. цоли 16С рРНА.Контаминација геномске ДНК Е. цоли је ≤1 копија.
ЛАМП Реацтион
| Компоненте | 25μЛ |
| 10×ХЦ Бст В2 пуфер | 2,5 μЛ |
| МгСО4 (100мМ) | 1,5 μЛ |
| дНТП (по 10 мМ) | 3,5 μЛ |
| СИТО™ 16 Греен (25×)a | 1,0 μЛ |
| Прајмер мешавинаb | 6 μЛ |
| Бст ДНК полимераза В2 (без глицерола) (8 У/ул) | 1 μЛ |
| Темплате | × μЛ |
| ддХ₂О | До 25 μЛ |
напомене:
1) а.СИТОТМ 16 Греен (25×): Према експерименталним потребама, друге боје се могу користити као замене;
2) б.Прајмер мешавина: добијена мешањем 20 µ М ФИП, 20 µ М БИП, 2,5 µ М Ф3, 2,5 µ М Б3, 5 µ М ЛФ, 5 µ М ЛБ и других запремина.
Реакција и стање
1 × ХЦ Бст В2 пуфер, температура инкубације је између 60°Ц и 65°Ц.
Инактивација топлоте
80 °Ц, 20 мин
