Робустарт Так ДНК полимераза
Робустарт Так ДНК полимераза је ДНК полимераза са врућим стартом.Овај производ не само да може боље да инхибира неспецифичну реакцију изазвану неспецифичним жарењем прајмера или агрегацијом прајмера у процесу припреме и амплификације ПЦР система.Због тога има одличну специфичност и ефикаснији је за амплификацију шаблона ниске концентрације, а погодан је и за мултиплексирану реакцију ПЦР амплификације.Штавише, овај производ има веома добру применљивост, а стабилни резултати амплификације се могу добити у различитим типовима ПЦР реакција.
Компоненте
1.5 У/μЛ Робустарт Так ДНК полимераза
2.10 × ПЦР пуфер ИИ (без Мг²+) (опционо)
3.25 мМ МгЦл2(опционо)
* 10 × ПЦР пуфер ИИ (без Мг²+) не садржи дНТП и Мг²+, молимо додајте дНТП и МгЦл2приликом припреме реакционог система.
Препоручене апликације
1.Брзо појачање.
2.Вишеструко појачање.
3.Директно појачавање крви, брисева и других узорака.
4.Откривање респираторних болести.
Кондиција складишта
-20°Ц за дуготрајно складиштење, треба добро промешати пре употребе, избегавати често замрзавање-одмрзавање.
*Ако након хлађења дође до падавина, то је нормално;препоручује се равнотежа на собној температури пре мешања и употребе.
Дефиниција јединице
Једна активна јединица (У) је дефинисана као количина ензима која инкорпорира 10 нмол деоксирибонуклеотида у материјал нерастворљив у киселини на 74°Ц током 30 минута користећи активирану ДНК сперме лососа као шаблон/прајмер.
Контрола квалитета
1.СДС-ПАГЕ електрофоретска чистоћа већа од 98%.
2.Осетљивост појачања, контрола од серије до серије, стабилност.
3.Нема активности егзогене нуклеазе, нема егзогене ендонуклеазе или контаминације егзонуклеазом
Упутства
Реацтион Сетуп
| Компоненте | Волумен (μЛ) | Коначна концентрација |
| 10 × ПЦР пуфер ИИ (без Мг²+)a | 5 | 1× |
| дНТП (10мМ сваки дНТП) | 1 | 200 μМ |
| 25 мМ МгЦл2 | 2-8 | 1-4 мМ |
| Робустарт Так ДНК полимераза (5У/μЛ) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 У |
| 25 × Прајмер мешавинаб | 2 | 1× |
| Темплате | - | < 1 μг/реакција |
| ддХ2O | До 50 | - |
напомене:
1) а.Пуфер не садржи дНТП и Мг²+, додајте дНТП и МгЦл2приликом припреме реакционог система.
2) б.Ако се користи за кПЦР/кРТ-ПЦР, флуоресцентне сонде треба додати у реакциони систем.Обично, коначна концентрација прајмера од 0,2 μМ даје добре резултате;ако је учинак реакције лош, концентрација прајмера се може подесити у опсегу од 0,2-1 μМ.Концентрација сонде се обично оптимизује у опсегу од 0,1-0,3 μМ.Експерименти са градијентом концентрације могу се извести да би се пронашла најбоља комбинација прајмера и сонде.
Протокол термичког циклуса
| Редовни ПЦРпроцес | |||
| Корак | Температура | време | Циклуси |
| Пре-денатурација | 95℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурација | 95℃ | 10-20 сец | 40-50 |
| Жарење / проширење | 56-64℃ | 20-60 сец | |
| Брзи ПЦРпроцес | |||
| Корак | Температура | време | Циклуси |
| Пре-денатурација | 95℃ | 30 сец | 1 |
| Денатурација | 95℃ | 1-5 сец | 40-45 |
| Жарење / проширење | 56-64℃ | 5-20 сец | |
Напомене
1.Брзина амплификације брзе ДНК полимеразе не би требало да буде мања од 1 кб/10 с.Брзина пораста и пада температуре, режим контроле температуре и ефикасност топлотне проводљивости различитих ПЦР инструмената увелико варирају, па се препоручује да се оптимизују оптимални услови реакције за одређени брзи ПЦР инструмент.
2.Систем је веома прилагодљив, са већом специфичношћу и осетљивошћу.
3.Погодан за употребу као високоосетљиви ПЦР реагенси за детекцију, и може се користити у мултиплекс ПЦР реакцијама амплификације.
4.5′→3′ активност полимеразе, активност 5′→3′ егзонуклеазе;нема 3′→5′ егзонуклеазне активности;нема функцију лектуре.
5.Погодно за квалитативно и квантитативно тестирање ПЦР и РТ-ПЦР.
6.3′ крај ПЦР производа је А, који се може директно клонирати у Т вектор.
7.Метода у три корака се препоручује за прајмере са ниским температурама жарења или за амплификацију фрагмената дужих од 200 бп.
