ЦХО ХЦП ЕЛИСА комплет
У овом тесту се користи имуносорбентна ЕЛИСА метода у једном кораку.Узорци који садрже ЦХОК1 ХЦП истовремено реагују са ХРП-обележеним козјим анти-ЦХОК1 антителом и анти-ЦХОК1 антителом обложеним на ЕЛИСА плочи, коначно формирајући сендвич комплекс антитела чврсте фазе-ХЦП-обележеног антитела.Невезано антиген-антитело се може уклонити прањем ЕЛИСА плоче.ТМБ супстрат се додаје у бунар за довољну реакцију.Развој боје се зауставља након додавања раствора за заустављање, а ОД или вредност апсорпције реакционог раствора на 450/650 нм очитава се читачем микроплоча.Вредност ОД или вредност апсорпције је пропорционална садржају ХЦП у раствору.Из овога се концентрација ХЦП у раствору може израчунати према стандардној кривој.
Апликација
Овај комплет се користи за квантитативно откривање садржаја протеинских остатака ћелије домаћина ЦХОК1 у узорцима.
Cопоненти
| С/Н | Саставни део | Концентрација | Услови складиштења |
| 1 | ЦХОК1 ХЦП Стандард | 0,5 мг/мЛ | ≤–20℃ |
| 2 | Анти-ЦХО ХЦП-ХРП | 0,5 мг/мЛ | ≤–20℃, заштитити од светлости |
| 3 | ТМБ | NA | 2-8℃, заштитити од светлости |
| 4 | 20 × ПБСТ 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Зауставите решење | NA | RT |
| 6 | Заптивачи за микроплоче | NA | RT |
| 7 | БСА | NA | 2-8℃ |
| 8 | Плоче за претпремазивање високе адсорпције | NA | 2-8℃ |
Потребна опрема
| Потрошни материјал / опрема | Мануфацтуре | Каталог |
| Читач микроплоча | Молецулар Девицес | Спецтра Мак М5, М5е или еквивалентно |
| Термомиксер | Епендорф | Еппендорф/5355, или еквивалентно |
| Вртложни миксер | ИКА | МС3 Дигитал, или еквивалентан |
Складиштење и стабилност
1.Транспорт на -25~-15°Ц.
2.Услови складиштења су приказани у табели 1;компоненте 1-2 се чувају ≤–20°Ц, 5-6 се чувају РТ,3、4、7、8 се чувају на 2-8℃;рок важења је 12 месеци.
Параметри производа
1.Осетљивост: 1нг/мЛ
2.Опсег детекције: 3-100 нг/мЛ
3.Прецизност: ЦВ унутар теста≤ 10%, ЦВ између теста≤ 15%
4.Покривеност здравственим радницима: >80%
5.Специфичност: Овај комплет је универзалан јер специфично реагује са ЦХОК1 ХЦП независно од процеса пречишћавања.
Припрема реагенса
1.ПБСТ 0,05%
Узмите 15 мл 20×ПБСТ 0,05%, разблаженог у ддХ2О, и направљен до 300 мл.
2.1,0% БСА
Узмите 1г БСА из боце и разблажите у 100 мл ПБСТ 0,05%, добро промешајте док се потпуно не раствори и чувајте на 2-8°Ц.Припремљени пуфер за разблаживање важи 7 дана.Препоручује се припрема по потреби.
3.Раствор за детекцију 2μг/мЛ
Узмите 48 μЛ 0,5 мг/мЛ Анти-ЦХО ХЦП-ХРП и разблажите у 11,952 μЛ 1% БСА да бисте добили коначну концентрацију од 2μг/мЛ раствора за детекцију.
4.КЦ и припрема ЦХОК1 ХЦП стандарда
| Тубе Не. | Оригинал | Концентрација | Волуме | 1%БСА | Укупан обим | Коначни |
| A | Стандард | 0,5 мг/мЛ | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Табела: Припрема КЦ и стандарда
Процедура анализе
1.Припремите реагенсе као што је наведено у „Припрема реагенса” изнад.
2.Узмите 50 μЛ стандарда, узорака и КЦ-а (погледајте табелу 3) у сваки бунар, а затим додајте 100 μЛ раствора за детекцију (2 μг/мЛ);Покријте плочу са заптивачем и ставите ЕЛИСА плочу на термомиксер.Инкубирајте на 500 обртаја у минути, 25±3 ℃ током 2 сата.
3.Окрените микроплочу у судоперу и баците раствор за облагање.Одпипетирајте 300 μЛ ПБСТ 0,05% у сваки бунар да бисте опрали ЕЛИСА плочу и одбацили раствор, и поновите прање 3 пута.Окрените плочу на чист папирни пешкир и осушите.
4.Додајте 100 μЛ ТМБ супстрата (погледајте табелу 1) у сваки бунар, затворите ЕЛИСА плочу и инкубирајте у мраку на 25 ± 3 ℃ 15 мин.
5.Одпипетирајте 100 μЛ стоп раствора у сваки бунар.
6.Измерите апсорбанцију на таласној дужини од 450/650 нм читачем микроплоча.
7.Анализирајте податке помоћу СофтМак-а или еквивалентног софтвера.Исцртајте стандардну криву користећи модел логистичке регресије са четири параметра.
Пример стандардне криве
НАПОМЕНА: Ако концентрација ХЦП у узорку премашује горњу границу стандардне криве, треба га правилно разблажити пуфером за разблаживање пре тестирања.
НАПОМЕНЕ
Решење за заустављање је 2М сумпорна киселина, рукујте пажљиво како бисте избегли прскање!
