БспКИ
БспКИ може бити рекомбинантно експримиран у Е. цоли која може препознати специфична мјеста и производи се под
БспКИ, рестрикциона ендонуклеаза ИИс, изведена је из рекомбинантног соја Е. цоли који носи клонирани и модификовани ген БспКИ из Бациллус спхаерицус.Може да препозна одређена места, а секвенца препознавања и места цепања су како следи:
5' · · · ·ГЦТЦТТЦ(Н) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · ЦГАГААГ(НННН) · · · · 5'
Карактеристике производа
1. Висока активност, брзо варење;
2. Ниска активност звезде, обезбеђујући прецизно сечење попут „скалпела“;
3. Без БСА и без животињског порекла;
Осетљивост на метилацију
Dам метилација:Нот Сенситиве;
Dцм метилација:Нот Сенситиве;
ЦпГ метилација:Нот Сенситиве;
Услови складиштења
Производ треба да се отпреми ≤ 0℃;Чувати на температури од -25 ~ - 15 ℃.
Бафер за складиштење
20 мМ Трис-ХЦл, 0,1 мМ ЕДТА, 500 мМ КЦл, 1,0 мМ дитиотреитола, 500 µг/мл рекомбинантног албумина, 0,1% Тритион Кс-100 и 50% глицерола (пХ 7,0°Ц).
Дефиниција јединице
Једна јединица је дефинисана као количина ензима потребна за варење 1 µг ДНК унутрашње контроле за 1 сат на 50°Ц у укупној реакционој запремини од 50 µЛ.
Контрола квалитета
Тест чистоће протеина (СДС-ПАГЕ):Чистоћа БспКИ је ≥95% одређена СДС-ПАГЕ анализом.
РНасе:10У БспКИ са 1,6 μг МС2 РНК током 4 сата на 50 ℃ не даје деградацију као што је утврђено електрофорезом у агарозном гелу.
Неспецифична активност Дназе:10У БспКИ са 1μг λ ДНК на 50 ℃ током 16 сати, у поређењу са 50 ℃ током 1 сата, не даје вишак ДНК као што је утврђено електрофорезом агарозног гела.
Лигација и поновно сечење:Након дигестије 1 μг λДНК са 10У БспКИ, фрагменти ДНК могу се везати са Т4 ДНК лигазом на 16ºЦ.И ови везани фрагменти се могу поново исећи са БспКИ.
Е. цоли ДНК: Е. цоли 16с рДНК-специфична ТакМан кПЦР детекција је показала да је остатак генома Е.цоли ≤ 0,1 пг/ул.
Остатак протеина домаћина:≤ 50 ппм
Бактеријски ендотоксин: ЛАЛ-тест, према Кинеској фармакопеји ИВ издање 2020, метода испитивања ограничења гела, опште правило (1143).Садржај бактеријског ендотоксина треба да буде ≤10 ЕУ/мг.
Реакциони систем и услови
| Саставни део | Волуме |
| БспК И (10 У/μЛ) | 1 μЛ |
| ДНК | 1 μг |
| 10 к БспК И пуфер | 5 μЛ |
| дд Х2О | До 50 μЛ |
Услови реакције: 50 ℃, 1~ 16 ч.
Инактивација топлоте: 80°Ц 20 мин.
Препоручени реакциони систем и услови могу пружити релативно добар ефекат варења ензима, што је само за референцу, молимо погледајте експерименталне резултате за детаље.
Примена производа
Варење рестрикцијске ендонуклеазе, брзо клонирање.
Напомене
1. Запремина ензима ≤ 1/10 запремине реакције.
2. Звездаста активност се може јавити када је концентрација глицерола већа од 5%.
3. Активност цепања може да се јави када је супстрат испод препорученог односа.
