Варм Старт Бст 2.0 ДНК полимераза (без глицерола)

Бст ДНК полимераза В2 је изведена из Бациллус стеаротхермопхилус ДНК полимеразе И, која има активност 5′→3′ ДНК полимеразе и јаку активност замене ланца, али нема активност 5′→3′ егзонуклеазе.Бст ДНК полимераза В2 је идеално погодна за померање ланаца, изотермно појачање ЛАМП (изотермно појачање посредовано петљом) и брзо секвенцирање.Бст ДНК полимераза В2 је верзија са врућим стартом заснована на Бст ДНК полимерази В2 (ХЦ5005А) добијеној технологијом реверзибилне модификације, која може инхибирати активност ДНК полимеразе на собној температури, тако да реакциони систем може да ради и формулише се на собној температури како би се спречило не -специфично појачање и побољшање ефикасности реакције, а ова верзија се може лиофилизовати.Поред тога, његова активност се ослобађа на високим температурама, тако да нема потребе за посебним кораком активације.

Компоненте

Бст ДНК полимераза В2 (без глицерола) (8У/μЛ)

Апликације

1.ЛАМП изотермно појачање

2.Реакција једноструког померања ДНК ланца

3.Високо ГЦ секвенцирање гена

4.ДНК секвенцирање нивоа нанограма.

Кондиција складишта

Транспортовати на 0°Ц и чувати на -25°Ц~-15°Ц.

Дефиниција јединице

Једна јединица је дефинисана као количина ензима која инкорпорира 25 нмол дНТП у материјал нерастворљив у киселини за 30 минута на 65°Ц.

Контрола квалитета

1.Тест чистоће протеина (СДС-ПАГЕ):Чистоћа Бст ДНК полимеразе В2 је ≥99% одређена СДС-ПАГЕ анализом користећи Цоомассие Блуе детекцију.

2.EдонуклеазаАктивност:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1 μг λДНК током 16 сати на 37 ℃ не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.

3.Еконуцлеасе Ацтивити:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1 μг λ -Хинд Ⅲ дигестије ДНК током 16 сати на 37 ℃ не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.

4.Ницкасе Ацтивити:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1 μг пБР322 ДНК током 16 сати на 37°Ц не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.

5.Активност РНасе:Инкубација реакције од 50 μЛ која садржи најмање 8 У Бст ДНК полимеразе В2 са 1,6 μг МС2 РНК током 16 сати на 37°Ц не доводи до детектљиве деградације као што је утврђено.

6.Е. цолиДНК:120 У Бст ДНК полимеразе В2 је прегледано на присуство геномске ДНК Е. цоли коришћењем ТакМан кПЦР са прајмерима специфичним за локус Е. цоли 16С рРНА.Контаминација геномске ДНК Е. цоли је ≤1 копија.

ЛАМП Реацтион

напомене:

1) а.СИТОТМ 16 Греен (25×): Према експерименталним потребама, друге боје се могу користити као замене;

2) б.Прајмер мешавина: добијена мешањем 20 µ М ФИП, 20 µ М БИП, 2,5 µ М Ф3, 2,5 µ М Б3, 5 µ М ЛФ, 5 µ М ЛБ и других запремина.

Реакција и стање

1 × ХЦ Бст В2 пуфер, температура инкубације је између 60°Ц и 65°Ц.

Инактивација топлоте

 80°Ц, 20 мин