Реагенс за ослобађање узорка
Реагенс за ослобађање узорка је за молекуларне ПОЦТ дијагностичке сценарије.За два система директне амплификације ЛАМП и директне амплификације ПЦР, нема потребе за екстракцијом нуклеинске киселине.Сирови лизат узорка може се директно појачати, циљни ген се може прецизно детектовати, време детекције узорка може се додатно скратити, што савршено одговара захтевима примене молекуларног ПОЦТ-а.Погодан је за брисеве носа, грла и друге врсте узорака.Обрађени узорци се могу директно користити за квантитативну ПЦР или ЛАМП детекцију флуоресценције у реалном времену, а исти резултати као и конвенционалне методе екстракције могу се постићи без компликованих операција екстракције нуклеинске киселине.
Услови складиштења
Транспортовати и чувати на собној температури.
Контрола квалитета
Функционална детекција – квантитативна кПЦР: Систем реагенса за ослобађање узорка од 800 μл је појачан
са 1000 копија новог псеудовируса, једним узорком назалног бриса, резултирајући сличним кривуљама амплификације иΔЦт вредности унутар ± 0,5 Цт.
Екпериментал Процедурес
1. Узмите 800 μл реагенса за ослобађање узорка и распоредите раствор за лизу у епрувету за узорковање од 1,5 мЛ
2. Узмите брис носа или брис грла са брисом; Процедура узимања узорка носног бриса: узмите стерилни брис и ставите га у ноздрве, полако напредујте до око 1,5 цм дубине, лагано ротирајте 4 пута уз носну слузокожу дуже од 15 секунди , затим поновите исту операцију на другој носној шупљини са истим бриском. Поступак узимања узорка бриса грла: узмите стерилни брис и нежно, брзо обришите фарингеалне крајнике и задњи зид ждрела 3 пута.
3.Одмах ставите брис у епрувету за узорковање.Главу бриса треба окретати и мешати у раствору за складиштење најмање 30 секунди да би се осигурало да је узорак потпуно елуиран у епрувети за узорковање.
4. Инкубација на собној температури (20~25℃) у трајању од 1 мин, припрема пуфера за лизу је завршена.
5. Оба система РТ-ПЦР и РТ-ЛАМП од 25 μл били су компатибилни са 10 μл количином додатка шаблона за експерименте детекције.
Напомене
1. Минимална количина директног лизата узорка која одговара једном брису може се подесити на 400 μл, што се може подесити према потребама тестирања.
2. Након што је узорак обрађен реагенсом за ослобађање узорка, препоручује се да се следећа фаза испитивања спроведе што је пре могуће, при чему је пожељно време чекања краће од 1 сата.
3. пХ лизата узорка је кисела, а систем за детекцију треба да има одређени пуфер.Погодан је за већину детекције ПЦР, РТ-ПЦР и ЛАМП флуоресценције са пХ пуфером, али није погодан за ЛАМП колориметријску детекцију без пуфера.
