Дназа И
ДНаза И (деоксирибонуклеаза И) је ендодеоксирибонуклеаза која може да свари једноланчану или дволанчану ДНК.Он препознаје и цепа фосфодиестарске везе да би произвео монодеоксинуклеотиде или једноланчане или дволанчане олигодеоксинуклеотиде са фосфатним групама на 5′-терминалу и хидроксил на 3′-терминалу.Активност ДНазе И зависи од Ца2+ и може се активирати јонима двовалентних метала као што су Мн2+ и Зн2+.5мМ Ца2+ штити ензим од хидролизе.У присуству Мг2+, ензим може насумично препознати и цепати било које место на било ком ланцу ДНК.У присуству Мн2+, двоструки ланци ДНК се могу истовремено препознати и одцепити на скоро истом месту да би се формирали равни ДНК фрагменти или лепљиви крајњи ДНК фрагменти са 1-2 нуклеотида који вире.
Продуцт Проперти
Дназа И говеђе панкреаса је експримирана у систему експресије квасца и пречишћена.
Cопоненти
| Саставни део | Волуме | |||
| 0.1КУ | 1КУ | 5КУ | 50КУ | |
| ДНаза И, без РНазе | 20μЛ | 200μЛ | 1мЛ | 10мЛ |
| 10×ДНасе И пуфер | 1мЛ | 1мЛ | 5× 1мЛ | 5× 10мЛ |
Транспорт и складиштење
1. Стабилност складиштења: – 15℃~-25℃ за складиштење;
2.Транспорт Стабилност: Транспорт испод леда;
3. Испоручује се у: 10 мМ Трис-ХЦл, 2 мМ ЦаЦл2, 50% глицерол, пХ 7,6 на 25 ℃.
Дефиниција јединице
Једна јединица је дефинисана као количина ензима која ће потпуно разградити 1 µг пБР322 ДНК за 10 минута на 37°Ц.
Контрола квалитета
РНасе:5У ДНазе И са 1,6 μг МС2 РНК током 4 сата на 37 ℃ не даје деградацију као што је утврђено електрофорезом у агарозном гелу.
Бактеријски ендотоксин:ЛАЛ-тест, према Кинеској фармакопеји ИВ издање 2020, метода испитивања ограничења гела, опште правило (1143).Садржај бактеријског ендотоксина треба да буде ≤10 ЕУ/мг.
Упутство за употребу
1. Припремите реакциони раствор у епрувети без РНазе у складу са пропорцијама наведеним у наставку:
| Саставни део | Волуме |
| РНА | Кс μг |
| 10 × ДНасе И пуфер | 1 μЛ |
| ДНаза И, без РНазе (5У/μЛ) | 1 У по μг РНК |
| ддХ2O | До 10 μЛ |
2,37 ℃ током 15 минута;
3. Додајте пуфер за терминацију да зауставите реакцију и загревајте на 65℃ 10 минута да инактивирате ДНазу И. Узорак се може директно користити за следећи експеримент транскрипције.
Напомене
1.Користите 1У ДНазу И по μг РНК или 1У ДНазу И за мање од 1μг РНК.
2.ЕДТА треба додати до коначне концентрације од 5 мМ да би се РНК заштитила од разградње током инактивације ензима.
